GST融合蛋白纯化磁珠

海狸GST融合蛋白纯化磁珠是专为高效、快速纯化谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白而设计的一种新型功能化材料, 可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白,极大地简化纯化工艺和提高纯化效率,适合 科研和工业领域便捷地进行GST融合蛋白的纯化。
与传统的柱层析纯化方式相比,采用海狸磁珠纯化GST融合蛋白,无需对粗蛋白样品进行多次长时间的高速离心, 也不需要过滤操作;无需控制流速,更不需要昂贵的层析设备。样品与磁珠的特异性结合、洗涤和目标蛋白洗脱变 得非常简单、快速、易操作,不存在样品流速控制的瓶颈,对于熟练的操作者来说,在一个小时内就能获得高纯度 的目的蛋白,不仅为研究者简化了流程,节省了时间,降低了成本,并可提高目标蛋白的纯化效率。使用磁珠能轻 松实现多样品平行处理,实现高通量,也可任意放大样品纯化规模。
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BeaverBeads™ GSH 70601-5 10%(v/v) 5mL ¥1000.00
BeaverBeads™ GSH 70601-100 10%(v/v) 2x50mL ¥5000.00
BeaverBeads™ GSH 70601-1000 10%(v/v) 4x250mL ¥30000.00
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产品名称 BeaverBeads™ GSH
磁珠粒径 30μm~150μm
GST融合蛋白结合量 可达10mg/mL磁珠(100%)
悬液浓度 10%(v/v)磁珠悬液
保存液 20%(v/v)乙醇
保存温度 4℃~30℃ (长期保存,建议置于4℃~8℃)
化学稳定性 常温可耐受70%乙醇、6M盐酸胍、0.1M氢氧化钠、0.1M醋酸1h

应用实例

1. 磁珠与传统层析柱纯化GST融合蛋白对比

注:图中2%、5%、10%、20%和100%指的是分别用谷胱甘肽含量为0.2mM、0.5mM、1mM和10mM的缓冲液对吸附目标蛋白后的磁珠进行洗脱。

2.平行操作稳定性高,可方便实现高通量和大规模蛋白纯化

                        结果:CV(目标蛋白纯度) = 1.6%,CV( 目标蛋白载量)= 4.5%。

此外,放大规模纯化样品时,只需同比例增加磁珠用量即可,并不影响目标蛋白的产率和纯度,完全不存在流速和样品体积的限制,海狸磁珠更加适用于大规模蛋白纯化生产。

3.不同批次间产品使用性能稳定,批次间差异小

                         结果:CV(目标蛋白纯度)= 0.7%,CV( 目标蛋白载量)= 4.7%

4.可重复使用

结果显示:同一样品,重复使用5次后,其目标蛋白载量没有明显下降,目标蛋白纯度基本不变。为了保障纯化的质量,建议3~5次后,进行清洗使用处理。

品特性

1. 蛋白纯化快捷

  •  操作简单,一步纯化即可得到高纯度蛋白;
  • 方便快捷,一个小时轻松实现蛋白纯化。

2. 蛋白纯化灵活

  •  可同时处理多个样品,实现高通量;
  •  可轻松实现蛋白浓度和体积的控制,方便后续样品精制;
  •  可轻松实现对纯化规模的控制;
  • 对微量和低丰度样品具有良好的纯化效果。

3. 蛋白纯化经济

  •  纯化流程短,蛋白产量及活性高;
  •  设备简单,减少了设备购买及维护成本,蛋白纯化门槛大大降低;
  •  纯化时间短,节约了时间成本;
  •  可同时进行多样品处理,实现自动化操作,节约人工成本;
  •  能够重复使用。

 

引用文献:

  1. Identification of Interacting Motifs Between Armadillo Repeat Containing 1 (ARC1) and Exocyst 70 A1 (Exo70A1) Proteins in Brassica oleracea;PROTEIN JOURNAL  卷: 35   期: 1   页: 34-43   出版年: FEB 2016
  2. A Novel Polyclonal Antiserum against Toxoplasma gondii Sodium Hydrogen Exchanger 1;KOREAN JOURNAL OF PARASITOLOGY  卷: 54   期: 1   页: 21-29   出版年: FEB 2016
  3. A pair of transposon‐derived proteins regulate active DNA demethylation in Arabidopsis;EMBO JOURNAL  卷: 35   期: 18   页: 2060-+   出版年: SEP 15 2016
  4. 泛素结合酶RAD6多克隆抗体的制备及初步鉴定;中国处方药 
  5. Orf Virus 002 Protein Targets Ovine Protein S100A4 and Inhibits NF-κB Signaling;FRONTIERS IN MICROBIOLOGY  卷: 7     文献号: 1389   出版年: SEP 13 2016
  6. N-terminal domains of ARC1 are essential for interaction with the N-terminal region of Exo70A1 in transducing self-incompatibility of Brassica oleracea;ACTA BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA SINICA  卷: 48   期: 9   页: 777-787   出版年: SEP 2016
  7. Identification of Interacting Motifs Between Armadillo Repeat Containing 1 (ARC1) and Exocyst 70 A1 (Exo70A1) Proteins in Brassica oleracea;PROTEIN JOURNAL  卷: 35   期: 1   页: 34-43   出版年: FEB 2016
  8. The potassium channel FaTPK1 plays a critical role in fruit quality formation in strawberry (Fragaria× ananassa);Plant Biotechnology Journal (2017), pp. 1–12,DOI: 10.1111/pbi.12824
  9. Functional characterization of rice CW-domain containing zinc finger proteins involved in histone recognition;Plant Science 263 (2017) 168–176,DOI:10.1016/j.plantsci.2017.06.013
  10. EV71 病毒中和表位和诺如病毒P 结构域嵌合蛋白的原核表达;China Biotechnology,2017,37( 1) : 1-6, DOI: 10.13523 /j.cb.20170101

70601-GST融合蛋白纯化磁珠说明书.pdf

GST融合蛋白纯化篇
1.如何纯化GST融合蛋白?

2.可纯化蛋白种类


3.磁珠挂不上目的蛋白
以下的处理方案的前提是样本里面有目的蛋白,如果是包涵体需要变性。
可能一:结合条件不对
理想的结合条件为pH 6.5-8.0,纯化之前确认磁珠是否采用缓冲液平衡以及蛋白样本的pH值,低于pH6.5或高于pH8时,融合蛋白与磁珠结合不充分导致结合效率低。
可能二:样本中目的蛋白的浓度偏低
目的蛋白的浓度过低,会严重影响磁珠与蛋白的结合。
两种方法可供选择:
a)浓缩蛋白样本;b)增加磁珠的浓度
可能三:检查目的蛋白是否聚集沉淀
在细胞裂解前加入DTT,在缓冲液中也加入DTT 。1-20mM的DTT 会显著增加某些GST融合蛋白的结合。
可能四:判断是否是因为GST失活
过度超声会破坏标签蛋白而减少其与磁珠的结合。减少超声破碎的时间和强度。
可能五:标签蛋白可能改变了GST 构相
降低结合的温度来改善结果。

4.目的蛋白在磁珠上,洗脱不下来
第一步:判断是否结合
取Mag beads加loading buffe煮沸,再跑page电泳。
如果确认有蛋白,且载量还很高,那么极有可能是形成了过蛋白沉积。
太多的蛋白沉积在磁珠孔内,无法洗脱。建议将目的蛋白样本稀释,少量纯化。
第二步:调节洗脱条件
洗脱缓冲液pH,酸性的都洗不下蛋白。尽量将洗脱液的pH值调到8.0。

5.洗脱样本里面有杂蛋白
可能一:非特异性吸附
提高平衡缓冲液中的盐浓度可以降低因为离子作用带来的非特异吸附。
在平衡缓冲液中添加0.5%吐温或Triton可以避免因为疏水相互作用导致非特异吸附,这些措施都可以电泳的杂带明显减少。
可能二:26KD的GST条带
GST融合蛋白的表达系统很容易表达到GST部分就终止,所以26KD左右的杂带是很常见的,那可以选择用不同浓度的还原谷胱甘肽去做阶段洗脱,如果还是分不开,那也许就得选择离子交换或者凝胶过滤等别的分离手段。
可能三:蛋白降解
如果用上述方法还是杂带多,那就地回头去看看破碎的条件是不是太剧烈或者温度控制不好导致蛋白短裂或者分解导致一些蛋白片段带标签,或者因为样品长时间保存导致水解等
可能四:蛋白相互作用
蛋白相互作用形成聚合体,导致杂带增加,而由于疏水相互作用或者因为离子作用可以通过添加表面活性剂或者增加离子强度得到改善,对于因为形成聚合体的可以在缓冲液和样品中加1-2mM巯基乙醇避免。

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海狸公司创立于2011年底,落户在风景秀丽的苏州工业园区独墅湖畔生物医药产业园(BioBAY)。公司以亚博在线国际官网术和生物材料表面技术为核心,通过试剂开发和设备技术整合,面向生物科研、体外诊断和基因检测领域,提供科研和工业级别的纳米磁珠原料、蛋白偶联中间体、免疫磁珠、核酸提取亚博在线、辅助生物耗材及配套自动化设备等系列产品。

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